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    上海研域生物操作常見細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

    發(fā)布時(shí)間: 2024-11-08  點(diǎn)擊次數(shù): 132次


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    細(xì)胞系(cell line)指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。 也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。(由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系(FiniteCellLine)、無(wú)限細(xì)胞系(InfiniteCellLine)),因此,細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞(特定環(huán)境下口語(yǔ)和書面語(yǔ)都使用),廣義是指可傳代的細(xì)胞。

    細(xì)胞傳代:

    a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

    b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,1000rpm離心5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

    c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

    細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無(wú)菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

    b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

    復(fù)蘇細(xì)胞:

    將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。


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